Autoanticorpo

Um autoanticorpo é um anticorpo (um tipo de proteína) produzido pelo sistema imune que atua contra uma ou mais proteínas do próprio indivíduo que o produziu. Os autoanticorpos têm as mesmas propriedades bioquímicas e físico-químicas dos outros anticorpos. A grande diferença está em suas propriedades imunológicas, ou seja, os autoanticorpos estão relacionados com as doenças auto-imunes.

Enquanto que a maioria dos anticorpos produzidos pelo corpo (pelos linfócitos B) reage contra antígenos estranhos (micróbios em geral, células tumorais, etc), os autoanticorpos reagem contra componentes do próprio organismo (proteínas celulares, DNA no núcleo celular). O aparecimento de grande quantidade de autoanticorpos no organismo é uma situação patológica que envolve a quebra da tolerância imunológica

Este tipo de reconhecimento aberrante geralmente provoca doenças autoimunes, sendo que o protótipo é o lúpus eritematoso sistêmico (LES) em cuja doença são encontrados autoanticorpos que reagem contra o núcleo das células dos pacientes.

Apesar de numerosas pesquisas científicas na área da imunologia de doenças autoimunes, os pesquisadores ainda não encontraram uma única causa (etiologia definida) para a quebra da tolerância imunológica e, em conseqüência, o aparecimento destas doenças.

Os resultados indicam que o fenômeno está associado à predisposição genética dos pacientes (presença de certos alelos HLA) junto com condições ambientais favoráveis.

Ver artigo principal: Autoimunidade

As causas que levam à produção de autoanticorpos são variadas e ainda não estão bem esclarecidas. Parece que a produção de alguns autoanticorpos se deve a uma certa predisposição genética combinada com algum tipo de gatilho ambiental, como uma doença viral ou a exposição prolongada a certos tipos de compostos químicos tóxicos. No entanto, não existe uma ligação direta entre a componente genética e o desenvolvimento da doença. Certas famílias podem ser suscetíveis a doenças autoimunes, sendo que nos seus membros as doenças autoimunes podem ser completamente diferentes, podendo mesmo existir membros que não desenvolvem qualquer tipo de doença. Em relação à predisposição pelo sexo, existem várias teorias diferentes, uma vez que as mulheres são muito mais suscetíveis do que os homens às doenças autoimunes, sendo esta suscetibilidade acentuada nos últimos anos da quarta década de vida.^[1] Uma das mais aceites sustenta que pode existir uma certa componente hormonal no desenvolvimento deste tipo de doenças, uma vez que as perturbações autoimunes são muito mais prevalentes entre as mulheres em idade fértil.^[1] Outra teoria sustenta que pode existir uma certa associação entre os genes expressos no cromossoma X e a predisposição para sofrer deste tipo de doença; esta teoria explicaria porque é que as mulheres, que têm duas cópias do cromossoma X, sofrem uma maior predisposição do que os homens, que têm apenas uma.^[1] Finalmente, outra linha de pensamento sustenta que as doenças autoimunes estão associadas a uma população particular de linfócitos B, chamados ABC (para Age Associated B Cells, linfócitos B associados à idade). Estes linfócitos expressam a cadeia αX integral (CD11c), e o seu número aumenta normalmente nos ratinhos fêmeas mais velhos, mas também aparecem nos ratinhos "modelo" de lúpus. Estes linfócitos B segregam anticorpos quando estimulados, e a redução destes linfócitos "in vivo" provoca uma redução dos anticorpos autorreativos. Um facto que poderá suportar esta teoria é que o desenvolvimento destes linfócitos requer sinalização através do receptor Toll-like 7. O gene que codifica este receptor encontra-se no cromossoma X.^[2]

Os fatores reumatóides (FR) são autoanticorpos que podem ser das classes IgG, IgM, IgA ou IgE e são dirigidos contra o fragmento Fc da imunoglobulina G. A técnica mais utilizada na clínica para a sua determinação é a aglutinação em látex. Nesta, as partículas de látex são revestidas com anticorpos de IgG humana. Numa etapa subsequente, é adicionada a amostra do doente em estudo. Se este soro contiver anticorpos que reconheçam os fragmentos Fc, haverá aglutinação das partículas de látex, que serão visíveis a olho nu ou poderão ser quantificadas por turbidimetria. A técnica do látex deteta principalmente FR da classe IgM, por se tratar de uma imunoglobulina pentavalente e eficiente como aglutinante. Os valores são apresentados em títulos ou em UI/mL. Títulos superiores a 1:80 ou superiores a 50 UI/mL são significativos. Outras técnicas que podem ser utilizadas para investigar a FR são a nefelometria e o ensaio imunoenzimático (ELISA). Cada técnica varia na forma como os resultados são expressos, pelo que o clínico deve ser informado no laboratório sobre qual a técnica utilizada e o que é considerado um resultado positivo. A FR está associada principalmente à artrite reumatoide (AR) e à síndrome de Sjögren (SS). 75% a 90% dos casos de artrite reumatóide apresentam FR positivo para IgM em títulos significativos > 1:80 (artrite reumatóide seropositiva). Os doentes com artrite reumatóide e títulos elevados de FR tendem a apresentar uma doença agressiva com maior envolvimento extra-articular. Os FR não são específicos para a artrite reumatóide. Podem ser encontrados noutras condições: tuberculose, endocardite bacteriana, sarcoidose, lepra, fibrose pulmonar, doenças hepáticas e sífilis. Podem também ser encontrados noutras doenças reumatológicas inflamatórias com títulos mais baixos do que na artrite reumatóide. Os FR, assim como outros autoanticorpos, podem ser encontrados na população saudável (1%-5%) em títulos baixos, e também em pessoas com mais de 60 anos, onde a frequência chega aos 20%, pelo que a presença de um FR positivo deve ser interpretada no contexto de cada doente.

Muitas proteínas com função estrutural, como a filagrina, a queratina e a histona, seguem uma via comum de modificações pós-traducionais envolvendo uma enzima denominada peptidil arginina desaminase; esta enzima atua sobre os resíduos de arginina nas proteínas, removendo o grupo amino-terminal. A modificação pós-traducional converte resíduos de arginina em citrulina, o que provoca a perda da carga positiva do aminoácido e, como consequência, alterações importantes nas interações do resíduo com os seus vizinhos. Esta modificação tem consequências estruturais importantes, favorecendo a formação de filamentos. Em 1998, Schellkens descreveu a existência de anticorpos antipeptídeos citrulinados em doentes com artrite reumatoide e, um ano depois, Van Jaarsveld demonstrou a especificidade para esta doença. A primeira geração de imunoensaios para detetar estes anticorpos utilizou variantes lineares da filagrina, mas já na segunda geração de imunoensaios começaram a ser utilizados peptídeos citrulinados sintéticos ciclizados. A ciclização dos péptidos favorece a exposição de determinantes antigénicos que apresentam o aminoácido citrulina, o que aumenta a sensibilidade e a especificidade dos ensaios.

O uso clínico destes produtos é mais recente. Estão presentes na artrite erosiva numa forma muito precoce. São úteis no diagnóstico precoce da artrite reumatóide, que se apresenta com FR negativo.

Estes anticorpos encontram-se na síndrome antifosfolípido (SAFL), uma doença autoimune que pode ocorrer isoladamente (SAFL primária) ou associada a outra doença, mais comummente o lúpus eritematoso sistémico (SAFL secundária). Clinicamente, esta síndrome é caracterizada por tromboses recorrentes e perdas frequentes de gestações precoces ou tardias (morte fetal). Os AFL mais comummente utilizados na prática clínica atualmente e que servem de rastreio para esta doença são os anticorpos anticardiolipina e o anticoagulante lúpico. Para identificar a AFL sorologicamente, ambos os anticorpos, ACL e anticoagulante lúpico, devem ser solicitados, uma vez que nem sempre ocorrem em conjunto. Diversas doenças, condições inflamatórias e/ou infeciosas podem causar AFL transitoriamente. Por outro lado, a persistência da positividade do LFA em pelo menos duas medições separadas por um mínimo de seis semanas é o que caracteriza o LSA.

São detetados por ELISA, que permite a identificação da classe de anticorpos e do seu título. Os mais associados ao LSA são os ACL da classe IgG, e em títulos moderados ou elevados. Os valores são dados em unidades GPL ou MPL ou APL, dependendo da classe de imunoglobulina identificada (IgG, IgM ou IgA, respetivamente).

Ver artigo principal: Anticoagulante lúpico

É detetado por técnicas de coagulação. Não é útil para saber o título de anticorpos nem o nível de positividade.

Trata-se de um grupo de anticorpos dirigidos contra proteínas presentes nas membranas interna e externa das mitocôndrias. Foram identificados 9 subtipos de AMA, designados por M1 a M9, ​​com diferentes importâncias clínicas. O subtipo mais frequentemente encontrado é o M2, um anticorpo dirigido especificamente contra a subunidade E2 do complexo enzimático piruvato desidrogenase. Este subtipo está clinicamente relacionado com a cirrose biliar primária (CBP), uma patologia que afeta predominantemente os ductos biliares do fígado, causando obstrução e, por fim, destruição do parênquima hepático. Os AMA M2 estão presentes em 95% dos doentes que preenchem outros critérios de diagnóstico de cirrose biliar primária,^[3] por isso, são uma ferramenta de enorme valor diagnóstico na ausência de outros indicadores. A presença de AMA demonstrou ser patológica (indicando doença), mas não patogénica (não causadora de doença). Títulos de anticorpos superiores a 1/80 apresentam uma especificidade de 97% e uma sensibilidade de 98%. 10% dos doentes com cirrose biliar primária apresentam títulos inferiores a 1/16. Geralmente, surgem nas mulheres entre a quarta e a sexta décadas de vida.

Estes anticorpos são úteis na determinação de vasculite. São detetados por imunofluorescência indireta (IFI), utilizando como substrato as células polimorfonucleares (PMN). Se o substrato da célula polimorfonuclear for fixado com etanol, podem ser identificados dois tipos de coloração: fluorescência citoplasmática (C-ANCA) e fluorescência perinuclear (P-ANCA). Os anticorpos que produzem C-ANCA são dirigidos principalmente contra a proteinase 3 (PR3) e são altamente específicos para a granulomatose de Wegener. Os anticorpos que produzem P-ANCA podem ser dirigidos contra a mieloperoxidase (MPO), elastase, catepsina e outros antigénios. Aqueles que reconhecem a mieloperoxidase estão associados a vasculite sistémica com envolvimento renal rapidamente progressivo. A especificidade do ANCA deve ser confirmada por ensaio imunoenzimático (ELISA).

Ver artigo principal: anticorpo antinuclear

A primeira evidência da existência de anticorpos antinucleares surge com a descrição da “Célula Lúpica”, ou célula LE, feita por Hargraves em 1948. Corresponde a um polimorfonuclear (PMN), que fagocita material nuclear de uma segunda célula reconhecida por autoanticorpos. Este fenómeno, que pode ser reproduzido in vitro, é um teste pouco sensível e pouco específico para o lúpus eritematoso sistémico; portanto, de pouca utilidade como técnica de rastreio. No entanto, o seu aparecimento in vivo em amostras de líquido pleural ou no líquido peritoneal indica que se trata de lúpus eritematoso sistémico. É uma técnica algo complexa para a deteção de anticorpos, pelo que foi substituída por outras. Os anticorpos antinucleares são mais frequentemente detectados por imunofluorescência indirecta (IFI), utilizando como substrato cortes de tecido de roedores (fígado, rim e estômago) ou linhas celulares neoplásicas em cultura, como a Hep-2, que são o substrato preferencial. Se estiverem presentes, os anticorpos antinucleares são reconhecidos utilizando um microscópio de fluorescência. A fluorescência pode apresentar diferentes padrões de coloração nuclear, e outros apresentam frequentemente coloração citoplasmática. Isto ocorre porque são reconhecidas diferentes estruturas antigénicas. Existem cinco padrões clássicos de coloração nuclear: homogéneo, granular, nucleolar, periférico e anticentrómero. Os padrões homogéneo e periférico são mais frequentemente observados no lúpus eritematoso sistémico, mas são inespecíficos. O padrão granular é frequentemente observado na síndrome de Sjögren e no lúpus eritematoso sistémico e está associado a anticorpos a-ENA. O padrão nucleolar é observado principalmente na esclerose sistémica progressiva. O único padrão altamente específico é o anticentrómero, que é um marcador de uma variante da esclerose sistémica progressiva chamada CREST. Os anticorpos antinucleares podem ser observados em praticamente todas as doenças do tecido conjuntivo, ou seja, apresentam uma elevada sensibilidade para este grupo de doenças reumatológicas, mas carecem de especificidade. Nas doenças do tecido conjuntivo, os anticorpos antinucleares apresentam, geralmente, títulos elevados (superiores a 1:160), especialmente na doença ativa. Tal como outros autoanticorpos, os anticorpos antinucleares podem surgir em indivíduos jovens, mas são mais frequentes em pessoas com mais de 60 anos de idade. Podem também estar presentes noutras condições patológicas (doenças hepáticas, doenças pulmonares, infeções crónicas, neoplasias e associadas a medicamentos); nestes casos, os seus títulos tendem a ser mais baixos. Em resumo, os anticorpos antinucleares são um bom teste de rastreio de autoanticorpos em doenças do tecido conjuntivo, reconhecendo qual é o antigénio alvo destes anticorpos (DNA, histonas ou proteínas não histonas ou RNA associado a].

Os anticorpos anti-DNA (a-DNA) podem ser dirigidos contra o ADN de cadeia simples (fita simples ou desnaturado) ou contra o ADN de cadeia dupla ou "nativo". Os a-DNAs nativos são bastante específicos para o lúpus eritematoso sistémico (95%) e, por isso, úteis no diagnóstico desta doença. Podem flutuar com a atividade da doença. Estão associados a complicações renais do lúpus. Os a-ADN nativos podem ser detetados por imunofluorescência indireta (IFI) utilizando o protozoário parasita hemoflagelado Crithidia luciliae como substrato. Podem também ser detetados pela técnica de Farr (baseada na precipitação de complexos imunes contendo ADN) e por [[ensaio de imunoadsorção enzimática|ELISA]. Os α-DNA de cadeia simples não são utilizados rotineiramente na prática clínica, uma vez que podem ser encontrados em muitas doenças reumatológicas e carecem de especificidade.

Os anticorpos dirigidos contra antigénios nucleares extraíveis são denominados α-ENAs. Estes antigénios nucleares são geralmente proteínas não histonas ou complexos RNA-proteína. Podem ser detectados por dupla difusão em ágar, ELISA ou imunoblot. O mais comum é o ELISA.

Os anticorpos anti-ENA mais utilizados na prática clínica são:

• Anti-Ro/SS-A: encontrado no lúpus eritematoso sistémico e síndrome de Sjögren, lúpus cutâneo subagudo e lúpus neonatal.
• Anti-La/SS-B: também observado no lúpus eritematoso sistémico e na síndrome de Sjögren.
• Anti-Sm: pouco frequente, mas muito específico para o lúpus eritematoso sistémico.
• Anti-RNP: pode ser observado no lúpus eritematoso sistémico e noutras doenças do tecido conjuntivo. Quando detetados como o único anticorpo, caracterizam a doença mista do tecido conjuntivo com conectivo (CMT).
• Anti-Scl-70 ou anti topoisomerase 1: comum na esclerodermia.
• Anti-Jo-1 ou anti-Histidil ARNt transferase. Encontrado em polimiosite, dermatomiosite ou doenças sobrepostas. Clinicamente, caracteriza um grupo de doentes com miosite, Raynaud e envolvimento pulmonar com fibrose intersticial.

Referências