Amiloide (micologia)

Em micologia, um tecido ou estrutura é considerado amiloide quando apresenta uma reação amiloide positiva ao ser submetido a um teste químico utilizando iodo como ingrediente, seja no reagente de Melzer ou na solução de Lugol, resultando em uma coloração azul a azul-preta. O termo "amiloide" deriva do latim amyloideus ("semelhante a amido").[1] Refere-se ao fato de que o amido produz uma reação semelhante, também chamada de reação amiloide. O teste pode ser aplicado a características microscópicas, como paredes de esporos ou de hifas, aparelho apical ou toda a parede de um asco; também pode ser uma reação macroscópica em tecidos onde uma gota do reagente é aplicada. Nas reações negativas, chamadas inamiloides ou não amiloides, as estruturas permanecem marrom-amareladas ou não mudam de cor. Uma reação que produz uma coloração avermelhada profunda a marrom-avermelhada é chamada de reação dextrinoide (sinônimo de pseudoamiloide) ou uma reação hemi-amiloide.

Reações com o reagente de Melzer

O reagente de Melzer é utilizado para expor tecidos ou células fúngicas ao reagente, geralmente em uma preparação em lâmina de microscópio, observando qualquer uma das três reações de cor:

  • Reação amiloide ou positiva ao Melzer, na qual o material reage com coloração azul a preta.
  • Reação pseudoamiloide ou dextrinoide, na qual o material reage com coloração marrom a marrom avermelhado.
  • Reação inamiloide ou negativa ao Melzer, na qual os tecidos não mudam de cor ou apresentam uma leve coloração marrom-amarelada.[2]

Entre as reações amiloides, dois tipos podem ser distinguidos:

  • Reação eu-amiloide, na qual o material se torna azul sem pré-tratamento com hidróxido de potássio (KOH).
  • Reação hemi-amiloide, na qual o material se torna vermelho na solução de Lugol e não apresenta reação no reagente de Melzer; mas quando pré-tratado com KOH, torna-se azul em ambos os reagentes.[3]

As reações com o reagente de Melzer são geralmente quase imediatas, embora, em alguns casos, a reação possa levar até 20 minutos para se desenvolver.[2]

As funções dos componentes químicos do reagente de Melzer são diversas. O hidrato de cloral atua como um agente clarificante, descolorindo e aumentando a transparência de materiais microscópicos de cor escura. O iodeto de potássio é usado para melhorar a solubilidade do iodo, que, por si só, é apenas parcialmente solúvel em água. Acredita-se que o iodo seja o principal agente de coloração no reagente de Melzer; pensa-se que ele reage com polissacarídeos semelhantes ao amido nas paredes celulares de materiais amiloides, embora o mecanismo de ação não seja completamente compreendido. Observou-se que materiais hemi-amiloides reagem de maneira diferente quando expostos ao reagente de Melzer em comparação com outras soluções de iodo, como a solução de Lugol, e que, em alguns casos, uma reação amiloide é observada em materiais previamente expostos ao KOH, mas uma reação inamiloide ocorre sem esse pré-tratamento.[3][4][5]

Um experimento no qual esporos de 35 espécies de basidiomicetos foram testados para reações com os reagentes de Melzer e Lugol mostrou que em uma grande porcentagem das espécies testadas os esporos apresentam reações muito diferentes entre os dois reagentes. Essas reações variaram de fracas ou inexistentes na solução de Lugol, a reações positivas ao iodo na solução de Lugol mas negativas ao reagente de Melzer, até reações dextrinoides na solução de Lugol enquanto apresentavam reações amiloides no reagente de Melzer.[6]

O reagente de Melzer forma um precipitado turvo quando combinado com soluções alcalinas, portanto, não pode ser usado em combinação ou em sequência direta com reagentes micológicos comuns, como soluções de hidróxido de potássio ou hidróxido de amônio. Quando o hidróxido de potássio é usado como pré-tratamento, a alcalinidade deve ser neutralizada antes da adição do reagente de Melzer.[2]

Hemi-amiloide

Hemi-amiloide em micologia refere-se a um caso especial de amiloidismo da parede celular, no qual a coloração azul pelo iodo só ocorre quando o tecido é previamente tratado com uma solução de hidróxido de potássio (KOH) ou outras bases fortes. Quando o iodo é aplicado diretamente, causa uma reação vermelha com a solução de Lugol, mas nenhuma reação com o reagente de Melzer.[7][8] A reação hemi-amiloide é conhecida até agora apenas no filo Ascomycota, mas nele é amplamente distribuída e constitui um importante critério de distinção taxonômica.[7][9] Se as paredes celulares se tornam azuis com reagentes de iodo sem pré-tratamento com KOH, isso é chamado de eu-amiloide. O termo amiloide abrange ambas as variantes.[8]

Propriedades

Um elemento de parede celular hemi-amiloide não se torna azul diretamente com reagentes de iodo adicionados a uma preparação aquosa, mas apenas quando pré-tratado com uma solução de hidróxido de potássio (KOH). Sem o pré-tratamento com KOH, o resultado depende muito do tipo de reagente de iodo: com a solução de Lugol (IKI), as estruturas hemi-amiloides reagem de vermelho a marrom-avermelhado, enquanto qualquer reação é suprimida ao usar o reagente de Melzer (MLZ). Esse efeito de mascaramento (falso inamiloide) é devido à alta concentração de hidrato de cloral no MLZ.[8] Estruturas eu-amiloides e hemi-amiloides pré-tratadas com KOH reagem com coloração azul, independentemente do tipo de reagente de iodo. Reações hemi-amiloides e eu-amiloides podem ocorrer simultaneamente, seja em locais espacialmente separados da parede celular (por exemplo, anel apical do asco eu-amiloide, paredes laterais hemi-amiloides), ou como um tipo intermediário na mesma região da parede. Neste último caso, uma sobreposição de azul e vermelho pode ser observada na solução de Lugol sem pré-tratamento com KOH: uma mudança de cor de azul para marrom-avermelhado sujo ocorre quando o reagente de iodo se difunde lentamente na preparação aquosa, porque a reação eu-amiloide aparece em concentrações de iodo mais baixas do que a reação hemi-amiloide.[6] Ascos com paredes totalmente reativas desse tipo hemi-amiloide exibem cores semelhantes a um arco-íris quando solução de Lugol de baixa concentração é aplicada.[8]

inamiloide hemi-amiloide eu-amiloide
IKI MLZ IKI MLZ IKI MLZ
antes de KOH – – vermelho – azul azul
pré-tratado com KOH – – azul azul azul azul

Reação hemi-amiloide (vermelha) em IKI antes do tratamento com KOH, em comparação com eu-amiloide (azul) e inamiloide (negativa). Apenas a reação hemi-amiloide depende fortemente do reagente de iodo aplicado (IKI, MLZ) e do pré-tratamento com KOH, sendo negativa em MLZ e azul quando pré-tratada com KOH (em IKI ou MLZ). A aplicação direta de IKI em uma montagem aquosa (sem KOH) é uma maneira direta de identificação de estrutura hemi-amiloide.[8]

IKI (= solução de Lugol) MLZ (= reagente de Melzer)
antes de KOH
pré-tratado com KOH

Reação de iodo de anéis apicais de ascos hemi-amiloides de Hysteropezizella (Helotiales) em função do reagente de iodo (IKI, MLZ) e pré-tratamento com KOH.[8]

Ocorrência, significado

A reação hemi-amiloide ocorre em muitos grupos de ascomycetos. Na maioria dos membros de Lecanorales e Ostropales, quer sejam liquenizados ou não, toda a camada externa da parede do asco reage como hemi-amiloide. Aproximadamente 20% dos Helotiales possuem anéis apicais de ascos hemi-amiloides, em comparação com cerca de 50% com anéis apicais eu-amiloides. Em Pezizomycetes e diferentes classes de Sordariomycetes, as reações hemi-amiloides são raras. Embora o hemi-amiloidismo seja um marcador taxonômico muito valioso que permite a diferenciação entre espécies ou gêneros, esse tipo de reação, em particular a reação vermelha em IKI, é frequentemente negligenciada. Esse descuido ocorreu desde que os micologistas passaram a usar o reagente de Melzer, introduzido em 1924, que quase completamente substituiu a solução de Lugol anteriormente utilizada. O hemi-amiloidismo foi relatado pela primeira vez ao aplicar o reagente de Melzer, que dava um resultado negativo sem KOH, mas uma reação azul quando tratado com KOH previamente.[10] Devido à frequência do hemi-amiloidismo em líquens, os liquenologistas geralmente não adotaram essa mudança e continuaram usando a solução de Lugol. O uso generalizado de KOH para intumescer fungos herbáricos antes do estudo contribui ainda mais para a frequente negligência do hemi-amiloidismo.[11]

Química

As reações ao iodo são comumente referidas à incorporação das moléculas de iodo no núcleo de um polissacarídeo helicoidal e formação de um complexo colorido. Uma hipótese da coloração da reação hemi-amiloide estabelece que seções helicoidais curtas de uma cadeia de carboidratos alternam com seções lineares mais curtas ou mais longas. As seções helicoidais curtas, semelhantes à dextrinoidade do glicogênio, causariam a reação vermelha pela inclusão de átomos de iodo na espiral. As seções lineares poderiam se enrolar sob a influência do KOH, resultando em cadeias helicoidais longas que causam uma coloração azul ao incluir iodo.[3]

Referências

  1. ↑ Ulloa, Miguel; Halin, Richard T. (2012). Illustrated Dictionary of Mycology 2nd ed. St. Paul, Minnesota: The American Phytopathological Society. p. 22. ISBN 978-0-89054-400-6 
  2. ↑ a b c Largent, David L; Stuntz, Daniel E.; Johnson, David; Watling, Roy (1977). How to Identify Mushrooms to Genus III: Microscopic Features (em inglês). Arcata, CA: Mad River Press. pp. 25–26. ISBN 978-0-916422-09-7 
  3. ↑ a b c Baral, H-O (1987). «Lugol's solution/IKI versus Melzer's reagent: Hemiamyloidity, a universal feature of the ascus wall». Mycotaxon. 29: 399–450 
  4. ↑ Kohn, Linda M; Korf, Richard Paul (1975). «Variation in ascomycete iodine reactions: KOH pretreatment explored». Mycotaxon. 3 (1): 165–172. doi:10.5962/p.413972Acessível livremente 
  5. ↑ Nannfeldt, John Axel (1976). «Iodine reactions in ascus plugs and their taxonomic significance». Transactions of the British Mycological Society. 67 (2): 283–287. doi:10.1016/S0007-1536(76)80135-0 
  6. ↑ a b Leonard, Lawrence M (2006). «Melzer's, Lugol's or iodine for identification of white-spored Agaricales?» (PDF). McIlvainea. 16 (1): 43–51 – via FUNGI Magazine 
  7. ↑ a b Baral, H.-O. (1987): Lugol's solution / IKI versus Melzer's reagent: hemiamyloidity, a universal feature of the ascus wall. Mycotaxon 29: 399-450
  8. ↑ a b c d e f Baral, H-O (2009). «Iodine reaction in Ascomycetes: why is Lugol's solution superior to Melzer's reagent? – in vivo veritas» (em inglês). Consultado em 29 de setembro de 2025 
  9. ↑ Rossman, A.Y. 1980. The iodine reaction: Melzer's vs. IKI. MSA newsletter 31:22.
  10. ↑ Kohn, L.M., and R.P. Korf. 1975. Variation in ascomycete iodine reactions: KOH pretreatment explored. Mycotaxon 3: 165-172
  11. ↑ Baral, H.O (1992). «Vital versus herbarium taxonomy» (PDF). Mycotaxon. 44 (2): 333-390. doi:10.5962/p.416290. Consultado em 29 de setembro de 2025 
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